PCR Troubleshooting and Optimization: The Essential Guide
Polymerázová reťazová reakcia (PCR) je základným nástrojom vedeckého výskumu a klinického testovania. PCR v reálnom čase, ktorá kombinuje amplifikáciu a detekciu v jednom prístroji, je rýchla a presná metóda na detekciu a kvantifikáciu nukleových kyselín.
Hoci PCR je veľmi výkonná technika, dosiahnuté výsledky sú platné len vtedy, ak sa použili vhodné kontroly. Okrem toho je na získanie špecifických, opakovateľných, reprodukovateľných a citlivých údajov potrebná správna optimalizácia podmienok PCR. V tejto knihe sa rozoberajú stratégie prípravy účinných kontrol a štandardov pre PCR, kedy by sa mali použiť a ako interpretovať informácie, ktoré poskytujú.
Zdôrazňuje význam optimalizácie pre účinnosť, presnosť a citlivosť metodiky PCR a poskytuje základné pokyny, ako riešiť problémy s neúčinnými reakciami. Odborníci na PCR opisujú techniky návrhu a optimalizácie, diskutujú o používaní vhodných kontrol, vysvetľujú význam štandardných kriviek a skúmajú zásady a stratégie potrebné na účinné riešenie problémov.
V knihe sa zdôrazňuje dôležitosť prípravy a kvality vzoriek, návrhu primerov, kontroly inhibítorov, predchádzania kontaminácii amplikonov a prostredia, optimalizácie kvality a koncentrácie činidiel a úpravy protokolu tepelného cyklovania na dosiahnutie optimálnej citlivosti a špecifickosti. Okrem toho sa v osobitných kapitolách rozoberá história PCR, výber prístrojového vybavenia, aplikácie PCR v metagenomike, analýza topenia s vysokým rozlíšením, usmernenia MIQE a PCR v mikrolitrovej mierke.
Stratégie, tipy a rady obsiahnuté v tomto stručnom zväzku umožnia vedcovi optimalizovať a efektívne riešiť problémy so širokou škálou techník vrátane PCR, PCR s reverznou transkriptázou, PCR v reálnom čase a kvantitatívnej PCR. Bude to nevyhnutná kniha pre každého, kto používa technológiu PCR.